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胞質(zhì)注射實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2025-07-25
訪(fǎng)問(wèn)量：54
廠(chǎng)商性質(zhì)：其他
一、胞質(zhì)注射實(shí)驗(yàn)技術(shù)定義與核心原理
胞質(zhì)注射是顯微注射技術(shù)的一種，通過(guò)顯微操作系統(tǒng)將外源基因直接注入細(xì)胞質(zhì)（而非細(xì)胞核），實(shí)現(xiàn)基因?qū)搿Ｆ浜诵臋C(jī)制包括：
非整合性表達(dá)：外源DNA以游離體形式存在，通過(guò)細(xì)胞自身轉(zhuǎn)錄機(jī)制表達(dá)，不整合至宿主基因組（區(qū)別于原核注射的隨機(jī)整合）。
適用性廣：可操作單細(xì)胞（如原代細(xì)胞、干細(xì)胞）及多細(xì)胞胚胎（如2細(xì)胞期胚胎）。
瞬時(shí)表達(dá)為主：外源基因隨細(xì)胞分裂逐漸丟失，表達(dá)周期較短（通常<72小時(shí)）。
生物學(xué)基礎(chǔ)：
依賴(lài)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶完成外源基因表達(dá)，無(wú)需核定位信號(hào)（NLS）介導(dǎo)。
二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程
（一）設(shè)備與材料準(zhǔn)備
| 組件 | 參數(shù)要求 | 功能說(shuō)明 | 引用來(lái)源 |
|---|---|---|---|
| 顯微操作系統(tǒng) | 微操縱器精度0.1μm，注射針內(nèi)徑<0.5μm | 精準(zhǔn)控制注射位置與深度 | |
| 外源DNA溶液 | 濃度1-5 ng/μL，溶于低離子強(qiáng)度緩沖液（如TE） | 減少細(xì)胞毒性，提升表達(dá)效率 | |
| 靶細(xì)胞類(lèi)型 | 原代角質(zhì)形成細(xì)胞、HEK-293T、早期胚胎等 | 需具備較強(qiáng)DNA攝取與表達(dá)能力 |
（二）操作步驟
關(guān)鍵參數(shù)：
注射壓力：5-10 hPa（過(guò)高導(dǎo)致細(xì)胞破裂）。
注射時(shí)長(zhǎng)：?jiǎn)渭?xì)胞≤30秒，避免細(xì)胞脫水。
存活率控制：熟練操作下細(xì)胞存活率>80%，胚胎存活率>70%。
（三）表達(dá)驗(yàn)證方法
熒光標(biāo)記法：
注射含GFP/RFP報(bào)告基因的載體，24小時(shí)后熒光顯微鏡觀察。
蛋白檢測(cè)法：
Western Blot或免疫組化檢測(cè)目標(biāo)蛋白表達(dá)。
胞質(zhì)注射實(shí)驗(yàn)
