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    DNA提取技術(shù)服務(wù)是怎樣子的呢?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-05-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1380次
     
      DNA提取技術(shù)服務(wù)是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細(xì)胞壁,然后采用一種新型的酵母質(zhì)粒純化柱實(shí)現(xiàn)從酵母細(xì)胞中進(jìn)行小量質(zhì)??焖俪樘岬脑噭┖小?/div>
      1、無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,12個(gè)樣品只需約1-1.5小時(shí)即可完成。
      2、試劑盒提供了破壁酶(Lyticase),酵母收集后,加入Lyticase消化去除細(xì)胞壁,接著采用傳3統(tǒng)堿裂法裂解細(xì)胞,然后將獲得的上清液轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱結(jié)合DNA,經(jīng)過離心快速洗滌,最后用洗脫液洗脫出酵母質(zhì)粒DNA。
      3、由于采用了高濃度的破壁酶,無需再使用玻璃珠,可以避免因?yàn)椴Aе榈臋C(jī)械作用帶來的酵母基因組DNA污染。
      DNA提取技術(shù)服務(wù)本實(shí)驗(yàn)方法的基本原理是,在高鹽狀態(tài)下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA被洗脫下來。此法簡便快捷,可在30分鐘內(nèi)同時(shí)提純二十多個(gè)樣品。從3~5ml培養(yǎng)過夜的含高拷貝質(zhì)粒的菌液中可以獲得10~20μg高純度的質(zhì)粒DNA,用于酶切、轉(zhuǎn)化、DNA自動(dòng)測(cè)序和手工測(cè)序等。
      DNA提取技術(shù)服務(wù)純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為20微克。質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量依賴于酵母攜帶質(zhì)粒的拷貝數(shù),酵母菌株以及生長條件。通常酵母質(zhì)粒的拷貝數(shù)較低,1.5-5ml培養(yǎng)過夜的酵母抽提獲得的質(zhì)粒DNA量約為1-3微克左右。高拷貝酵母質(zhì)粒抽提時(shí)的得率會(huì)大大提高。抽提所得質(zhì)粒的量與酵母培養(yǎng)濃度、質(zhì)??截悢?shù)、酵母品系等因素有關(guān)。
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