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    DNA提取技術(shù)服務(wù)為你講述DNA提取的方法

    發(fā)布時間: 2022-02-25  點擊次數(shù): 1461次
     
      DNA提取技術(shù)服務(wù):從石蠟包埋組織中純化基因組DNA:先快速純化高品質(zhì)、即用型DNA,然后重復(fù)性好,產(chǎn)量高,Z后去除污染物和抑制劑。
      DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?;瘜W(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。
      DNA提取方法:
      1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb
      2、甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
      3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
      4、異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
      5、表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
      6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。
      7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。
      提取原則:
      1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性;
      2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;
      3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到低程度;
      4、其他核酸分子,如RNA,也應(yīng)盡量去除。
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